茶黄素检测

一、检测方法

‌高效液相色谱法（HPLC）‌

‌原理‌：利用反相色谱柱分离茶黄素单体，通过DAD检测器（检测波长280nm）或ELSD检测器定量分析。

‌步骤‌：

样品经甲醇或70%乙醇提取后离心；

流动相采用甲醇-水梯度洗脱（如65:35），色谱柱选用Zorboax Eclipse XDB-C；

以茶黄素标准品（如TF、TF-3-G、TF-3'-G、TF-3,3'-diG）绘制标准曲线。

‌优势‌：灵敏度高（检出限0.5μg/g），可分离4种主要茶黄素单体。

‌分光光度法‌

‌Roberts法‌：乙酸乙酯萃取茶黄素和部分茶红素，分液后于波长380nm和460nm测定吸光度，计算茶黄素含量。

‌Flavognost试剂法‌：茶黄素与Flavognost试剂生成绿色络合物（检测波长625nm），操作简便但需控制pH和温度。

‌氯化铝比色法‌：茶黄素与AlCl₃生成红色复合物（检测波长525nm），成本低但易受浑浊干扰。

‌其他方法‌

‌毛细管电泳法‌：快速分离茶黄素单体，需高纯度标准品；

‌柱层析法‌（Sephadex LH-20）：分离茶黄素单体，操作复杂但定量精准。

二、仪器与试剂

‌检测方法‌        ‌         核心仪器‌                        ‌                   关键试剂‌

HPLC法           高效液相色谱仪、DAD检测器      甲醇、茶黄素单体标准品

Roberts法       分光光度计、离心机                    乙酸乙酯、碳酸氢钠溶液

Flavognost     试剂法 分光光度计                       Flavognost试剂、pH缓冲液

三、执行标准

‌HPLC法‌：GB/T 8313-2018（茶叶）3、ISO 14502-1:2005（国际标准）；

‌分光光度法‌：T/DCQHJY 01-2022（茶黄素含量测定）。

四、注意事项

‌样品处理‌

茶叶需研磨至40目以下，提取温度≤70℃以避免热敏成分分解；

含脂溶性干扰物样品需经正己烷脱脂处理。

‌干扰控制‌

分光光度法中维生素C等还原性物质会干扰显色反应，需优化前处理步骤；

HPLC流动相比例需根据茶黄素极性调整，避免峰重叠。

‌校准要求‌

分光光度计需每日校准标准曲线（误差≤5%）；

HPLC法需定期验证色谱柱分离效率（理论塔板数≥5000）。