皮内反应试验

皮内反应试验是用于评估物质对皮肤局部刺激或致敏作用的经典毒理学检测方法，广泛应用于化妆品、药品、化工原料等安全性评价中。

以下从试验目的、原理、操作流程、结果判定及应用场景等方面展开说明：

试验目的

检测局部刺激性：判断受试物是否会引起皮肤红斑、水肿、坏死等急性炎症反应，评估其对皮肤组织的直接损伤能力。

筛查致敏潜力：通过观察机体免疫系统对受试物的应答，初步判断其是否具有诱发过敏反应的可能性（部分致敏试验需结合诱导 - 激发流程，如豚鼠最大致敏试验）。

安全性分级：为受试物的皮肤安全性分类提供依据，如区分 “无刺激”“轻度刺激”“重度刺激” 等，辅助监管部门制定使用规范。

试验原理

刺激性反应：受试物直接作用于皮肤真皮层，刺激血管扩张、炎症细胞浸润，导致红斑、水肿等局部损伤，其程度与物质的化学性质（如酸碱度、脂溶性）、浓度及作用时间相关。

致敏性反应：若受试物为过敏原，可诱导 T 淋巴细胞活化，引发迟发型超敏反应（IV 型），表现为注射部位在激发后出现红肿、硬结等免疫应答。

常见试验类型及操作流程

急性皮内刺激试验（以动物试验为例）

实验动物：常用成年健康的兔、豚鼠或大鼠，试验前需剃除背部皮肤毛发，暴露测试区域。

操作步骤：

剂量设置：受试物若为液体可直接使用，固体需溶解或制成混悬液，同时设置生理盐水（阴性对照）和阳性对照（如 10% 十二烷基硫酸钠，SDS）。

皮内注射：在动物背部两侧选择多个位点（如每侧 3-5 个点），分别注射 0.1 mL 受试物、对照液，避免损伤血管。

观察时间点：注射后分别于 1h、24h、48h、72h 观察注射部位，记录红斑（发红）、水肿（肿胀）的程度及持续时间。

致敏性皮内反应试验（以豚鼠最大致敏试验为例）

诱导阶段：通过皮内注射 + 佐剂（如弗氏完全佐剂）增强抗原递呈，使动物免疫系统对受试物产生致敏状态。

激发阶段：诱导 2-3 周后，将受试物涂抹或皮内注射于动物未致敏部位，观察是否出现红斑、丘疹等过敏反应，通常在 24-72h 判断结果。

结果判定与评分

刺激强度评分：依据红斑和水肿的严重程度分级打分（如 0 分为无反应，4 分为重度红斑或坏死），计算平均分值后参考标准判定刺激等级：

无刺激：平均分≤0.4；

轻度刺激：0.4＜平均分≤2.0；

中度刺激：2.0＜平均分≤5.0；

重度刺激：平均分＞5.0。

致敏率计算：在致敏试验中，统计出现阳性反应的动物比例，结合阈值（如致敏率＞10% 提示具有致敏潜力）评估风险。

应用场景与注意事项

应用场景：

化妆品安全评价：欧盟 REACH 法规、中国《化妆品安全技术规范》均要求对原料进行皮内刺激试验。

药品研发：注射剂、外用制剂需评估其对皮肤的局部毒性，避免临床使用中引发炎症或过敏。

化工产品：如洗涤剂、染发剂等，上市前需通过皮内反应试验证明其皮肤安全性。

注意事项：

动物伦理：试验需遵循 3R 原则（减少、替代、优化），尽可能使用替代方法（如体外皮肤模型）减少动物使用。

受试物特性：高毒性、强腐蚀性物质需稀释后测试，避免直接导致动物皮肤坏死，影响结果判断。

对照设置：必须包含阴性和阳性对照，阳性对照需确保能引发可检测的反应，以验证试验体系的有效性。

替代方法发展

随着动物保护意识提升，体外 3D 皮肤模型（如 EpiDerm™、EpiSkin™）逐渐应用于皮内反应试验，通过检测模型中细胞活力、炎症因子（如 IL-8）释放量评估刺激或致敏性，具有通量高、伦理争议小的优势，但仍需与动物试验结果交叉验证以保证可靠性。

皮内反应试验作为皮肤毒性评估的基础手段，其结果直接关系到消费品、化学品的安全准入，而技术的迭代正推动该领域向更科学、更人道的方向发展。