鼠疫菌诊断血清检测

检测项目

1.F1抗原特异性抗体效价测定：采用试管凝集法（TAT）定量分析血清抗体浓度梯度（1:10至1:1280）

2.交叉反应排除试验：验证布鲁氏菌/土拉弗朗西斯菌等γ变形菌纲病原体的非特异性反应（阈值≤1:20）

3.IgM/IgG抗体分型检测：ELISA法测定急性期与恢复期双份血清4倍以上滴度升高

4.抗吞噬因子（pH6抗原）表达验证：Westernblot法检测78kDa特异性蛋白条带

5.假结核耶尔森菌鉴别诊断：PCR扩增pla基因（GenBankAF053945）进行序列比对

检测范围

1.临床疑似病例血清样本（采集时间窗：发病后7-21天）

2.啮齿类动物脏器浸出液（肝/脾/肺组织按1:5PBS匀浆）

3.蚤类媒介生物中肠内容物悬液

4.环境样本分离菌株培养物（BCYE培养基28℃培养48h）

5.疫苗免疫效果评价血清（EV76株接种后第14/28天双相采样）

检测方法

1.GB17012-2020《鼠疫诊断标准》规定的试管凝集试验（终浓度0.5%甲醛灭活抗原）

2.ISO2004:2019《动物源性传染病实验室诊断规程》间接血凝试验（IHA）标准化流程

3.WS279-2008《鼠疫诊断标准》胶体金免疫层析试纸条现场筛查法

4.GB/T38502-2020《消毒剂实验室杀菌效果检验方法》配套中和剂验证方案

5.SN/T2777-2011《国境口岸鼠疫检验规程》实时荧光定量PCR确证程序

检测设备

1.ThermoMultiskanFC酶标仪（波长450nm/630nm双通道读数）

2.EppendorfCentrifuge5430R高速冷冻离心机（最大RCF30,130g）

3.Bio-RadCFX96Touch实时荧光定量PCR仪（FAM/HEX双探针系统）

4.OlympusCX43生物显微镜（100油镜观察细菌形态学特征）

5.SartoriusQuintix224-1CN分析天平（精度0.1mg称量范围220g）

6.MemmertINCO108细胞培养箱（CO₂浓度控制精度0.2%）

7.HamiltonMicrolabSTARlet全自动液体工作站（加样精度1μL）

8.BDBACTECFX40血培养系统（需氧/厌氧双模式监测）

9.ShimadzuUV-1900i紫外分光光度计（波长范围190-900nm）

10.LabconcoClassIIA2生物安全柜（垂直层流风速0.38m/s20%）