苹果酸脱氢酶测定

一、检测原理与核心方法

‌紫外比色法‌

‌反应机制‌：MDH催化L-苹果酸与NAD⁺反应生成草酰乙酸和NADH，通过监测340nm处NADH吸光度下降速率计算酶活性（正反应）或利用草酰乙酸与NADH反应（逆反应）‌。

‌操作流程‌：

样本与反应液（含苹果酸、NADH、缓冲液）混合，37℃孵育后分时段测定吸光度变化‌。

酶活力计算公式基于ΔA（吸光度差值）、摩尔消光系数及样本参数（如体积、蛋白浓度）‌。

‌试剂盒检测‌

‌商用试剂盒‌：

‌血清检测‌：采用速率法，5分钟内完成测定，灵敏度高（CV=1.2%），支持紫外分光光度计或酶标仪检测‌。

‌组织/细胞检测‌：需制备匀浆液离心取上清，按蛋白浓度或样本鲜重计算酶活力单位（nmol/min/mg prot或nmol/min/g）‌。

二、样本处理与仪器要求

‌样本类型与预处理‌

‌血清/血浆‌：空腹采血，避免溶血，离心后取上清直接检测‌。

‌组织/细胞‌：

动物组织：生理盐水匀浆后离心取上清‌。

培养细胞/植物：PBS破碎后离心‌。

‌仪器配置‌

‌核心设备‌：紫外分光光度计（340nm）、恒温孵育箱（37℃）、离心机及微量移液器‌。

‌高通量检测‌：酶标仪或半自动生化分析仪适配96孔板，支持批量样本分析‌。

三、临床参考值与意义

‌正常范围‌

‌成人血清‌：80～310 U/L（速率法）‌。

‌新生儿‌：约为成人值的2倍‌。

‌异常结果解读‌

‌活性升高‌：

‌心血管疾病‌：心肌梗死（胸骨后剧痛、心律失常）‌。

‌血液系统异常‌：溶血性疾病、巨幼红细胞贫血‌。

‌恶性肿瘤‌：肝癌转移‌。

四、注意事项与质控

‌实验优化‌

‌干扰控制‌：避免样本脂血、黄疸，确保试剂避光保存以减少背景干扰‌。

‌标准曲线‌：预实验需用丙酮酸梯度溶液建立吸光度-浓度标准曲线‌。

‌临床检测要求‌

‌空腹采血‌：检测前禁食12小时，避免饮食影响酶活性‌。

‌重复检测‌：异常结果需结合其他指标（如LDH、CK-MB）综合判断‌。